本氏烟中ALY916、Gβ互作蛋白的筛选及其功能的研究

【摘要】植物病原菌产生的激发子和病程相关分子模式(pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMP)是一类重要的信号分子,模仿非亲和互作中植物与病原菌的信号交流,启动不同的级联信号途径,诱发植物的抗病性,导致过敏性细胞死亡(hypersensitivecelldeath,HCD)和气孔关闭。NbALY916是一个调控过敏性细胞死亡的基因,研究发现该基因沉默能抑制Nep1诱导的HR,减缓harpin诱导的HR,且参与MAPKKKa和WRKY2的调控；异三聚体G蛋白连接着细胞表面的受体和下游的效应因子,其中Gp亚基沉默抑制细菌蛋白激发子harpin诱导的过敏反应,Gp亚基包括Gβ1和Gβ2,研究发现它们参与的细胞防卫反应调节途径有所差异。通过对ALY916及Gβ亚基的互作蛋白的筛选,找寻到下游或者上游的调控基因,对完善激发子诱导的防卫反应信号通路途径提供重要依据,可以为有效的病害防控策略提供新的研究思路。本文利用酵母双杂交技术,以ALY916为诱饵蛋白,在烟草cDNA文库中进行靶标筛选,得到一些涉及植物抗逆机制和重要新陈代谢的基因。克隆Nbl-2编码蛋白属于糖原合成酶激酶(GSK)家族蛋白；克隆Nb2-13编码一种过氧化物酶体膜相关蛋白;克隆Nb4-2编码一种醛脱氢酶；克隆Nb7-33编码一类GTP结合蛋白；克隆Nb25-8编码核酮糖二磷酸羧化酶的激活酶前体；克隆Nb12-33编码一个RNA解旋酶；克隆Nb16-3编码一个磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase),还有九个克隆比对到的基因功能并未有人进行研究,有待我们探索。分别以G蛋白Gβ1和Gβ2为诱饵蛋白,在烟草cDNA文库筛选其互作蛋白,得到Gβ1和Gβ2的互作蛋白后,选取转化得到重复率较高的基因为对象,构建PVX病毒表达载体,采用病毒诱导基因沉默(virusinducinggenesilencing,VIGS)技术筛选能调控受激发子(Nep1、harpin和INF1)诱导的过敏性细胞死亡的基因,筛选到能与Gβ1和Gβ2都互作的二磷酸核酮糖羧化酶小亚基(ribulosebisphosphatecarboxylasesmallsubunit,Rbcs)基因,该基因沉默后,能抑制harpin诱导的HR,Rbcs沉默后能抑制Nep1、harpin诱导的气孔关闭,harpin诱导的NO积累也受到抑制,该发现对Gp参与的过敏性细胞死亡信号调控途径提供了很好的解释依据。
【作者】刘界文；
【导师】郑小波；
【作者基本信息】南京农业大学，植物病理学，2013，硕士
【关键词】激发子；过敏性细胞死亡；酵母双杂交；NbALY916GβRbcs；

【参考文献】
[1]宋增芳.精准远程灌溉物联网墒情监测控制系统研制[D].甘肃农业大学,农业水土工程,2013,硕士.
[2]徐颖.电子商务中电子签名之若干法律问题研究[D].吉林大学,法律,2004,硕士.
[3]吴小清.转型期国内上市银行发展战略与竞争力演变研究[D].华侨大学,金融（专业学位）,2014,硕士.
[4]刘亚男.两亲性纤维素基表面活性剂的合成、胶束化及其在乙醇中的自组装行为[D].河北工业大学,2013.
[5]刘洋.红参多糖对面包品质及STZ糖尿病小鼠血糖、血脂的影响[D].吉林农业大学,食品加工与安全,2012,硕士.
[6]张智.培菲康对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠肠黏膜屏障的作用[D].广西医科大学,儿科学（专业学位）,2013,硕士.
[7]张伟娜,何伟,张新荔.石墨烯的制备方法及其应用特性[J].化工新型材料,2010,S1:15-18+131.
[8]覃征,李爱国.时间序列数据的稳健最优分割方法[J].西安交通大学学报,2003,04:338-342.
[9]郭冬艳.退化草地的生态化学计量学研究[D].吉林大学,土地资源管理,2013,硕士.
[10]徐志梅.英语语音意识训练对儿童汉语语音意识和早期阅读能力的影响[D].山东大学,英语语言文学,2013,硕士.
[11]孙光,陈金富,陈志光,曾耿晖,李一泉,邱建.计及继电保护系统多模式隐藏故障的电网N-k风险分析[J].电力系统自动化,2014,15:37-43.
[12]郭品晶.原创设计宣传画册翻译实践报告[D].曲阜师范大学,翻译（专业学位）,2013,硕士.
[13]张沛,吴潇雨,和敬涵.大数据技术在主动配电网中的应用综述[J].电力建设,2015,01:.
[14]丁轶.S物流企业物流金融应用研究[D].东华大学,物流工程（专业学位）,2014,硕士.
[15]刘璇.《浮生六记》林译本的译者风格研究[D].四川外国语大学,英语语言文学,2014,硕士.
[16]孙宝法.DNA序列数据的聚类挖掘[J].河南科学,2004,05:600-604.
[17]李雅斌.论我国行业协会在反倾销中的地位和作用[D].首都经济贸易大学,经济法,2004,硕士.
[18]刘永新.工程监理可持续发展因素剖析[J].上海企业.2004(06)
[19]肖玲玲.广州市自来水公司北部水厂供水项目商业计划书[D].华南理工大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[20]陈颖.国防园区网管系统的设计和实现[D].西北工业大学,2003.
[21]单玲星.含芳基四氮唑烷基侧链酰内酯衍生物的合成与抗菌活性研究[D].暨南大学,药物化学,2013,硕士.
[22]林章清.高温合成异质结构复合材料及其应用研究[D].苏州大学,无机化学,2014,硕士.
[23]赵磊.皮层脑电分析方法及其在大脑意识活跃状态评价中的应用研究[D].杭州电子科技大学,模式识别与智能系统,2013,硕士.
[24]袁启萌.高层建筑火灾情景下人群疏散行为研究[D].清华大学,安全科学与工程,2013,硕士.
[25]周云.唐代太府寺研究[D].山东大学,中国古代史,2013,硕士.
[26]马妮.针灸治疗膝骨关节炎近十年研究进展及贺氏火针治疗的初步疗效观察[D].北京中医药大学,针灸推拿学,2014,硕士.
[27]金烁.医学图像配准技术的研究及其在放射治疗PET-CT系统中的应用[D].山东大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[28]张悦禄.兰州市中专学生沉迷网络的原因和对策研究[D].西北师范大学,教育,2003,硕士.
[29]陶焕涌.市场经济条件下大学生思想价值观念倾向和教育措施刍议[J].南京理工大学学报(社会科学版).1994(03)
[30]袁小芳,王耀南.一种模糊支持向量机控制器的研究[J].控制与决策,2005,05:537-540.
[31]宋国栋.压缩机组防喘振控制系统的研究[D].东北大学,控制理论与控制工程,2009,硕士.
[32]李伟.狄拉克费米子体系中的手征相变[D].中国科学技术大学,2010.
[33]陶滢冰.中英歌曲中“爱”隐喻的认知比较研究[D].湖南师范大学,英语语言文学,2014,硕士.
[34]金碚.工业的使命和价值——中国产业转型升级的理论逻辑[J].中国工业经济,2014,09:51-64.
[35]许圳鹏.紫白膏对混合痔术后消肿止血的临床和实验研究[D].福建中医药大学,中医外科学（专业学位）,2014,硕士.
[36]张震.基于四元数理论的双基地ULA-MIMO雷达目标参数估计方法研究[D].吉林大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[37]李玲.超声实时组织弹性技术评估兔颈动脉粥样硬化斑块分型与病理的对照研究[D].福建医科大学,影像医学与核医学,2014,硕士.
[38]杨汶坡.基于不确定语言多属性决策的房地产投资风险分析[D].扬州大学,管理科学与工程,2011,硕士.
[39]关锐杰.关于我国合理利用海洋渔业生物资源问题的探讨[J].现代渔业信息.1995(07)
[40]刘红.高中化学教学中“情景素材”的开发和应用[D].华东师范大学,化学教学,2003,硕士.
[41]周辉.基于SOA集成环境下整车企业产品协同开发模式研究[D].重庆大学,工业工程,2014,硕士.
[42]黄洋.基于聚类和项目类别偏好的协同过滤推荐算法研究[D].浙江理工大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[43]谢彩丽.速度向量成像技术评价妊高征对胎儿左心室功能影响的研究[D].青岛大学,影像医学与核医学,2012,硕士.
[44]叶文锦.技术创新与高技术产业国际竞争力的研究[D].浙江工业大学,2012.
[45]刘鑫.基于移动代理的适应性配置管理系统[D].河北大学,计算机应用技术,2003,硕士.
[46]沈金海.碱促进的“一锅法”合成多取代吡咯衍生物的研究[D].华侨大学,化学,2013,硕士.
[47]张景怡.民族社会工作基本问题研究[D].中南民族大学,社会学,2013,硕士.
[48]张婧媛.高科技企业领导者个性对团队绩效的影响研究[D].哈尔滨工业大学,企业管理,2014,硕士.
[49]张帆,李忠海,席慧,张莹,黄志强.纳米材料在食品有害污染物检测中的应用进展[J].分析测试学报,2013,12:1523-1528.
[50]吴林烽.电参数对小间隙电解加工影响规律研究[D].浙江理工大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.